Klotho通过抑制高糖诱导的微RNA-21a-5p高表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制

薛萌1; 杨炎林; 乐颖1; 邹美娜; 贾懿劼; 郑宗基; 任昰婧; 董文慧; 薛耀明

2020

10.3760/cma.j.cn115791-20200823-00526

中华糖尿病杂志   影响因子和分区

1674-5809

目的:探索Klotho抑制高糖条件下肾小管上皮细胞（HK-2）微RNA（miR）-21a-5p表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制。方法:将体外培养的HK-2分为低糖组、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）和高渗组（30 mmol/L甘露醇）；按照高糖刺激时间分为4组：0、12、24、48 h；按照是否转染pcDNA3.1-Klotho/pcDNA3.1-Vector及转染后低或高糖刺激分为4组：低糖组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组；按照转染si-Klotho/si-Negative后是否加入二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）和低或高糖刺激分为6组：低糖+si-Klotho组、低糖+si-Negative组、低糖+si-Klotho+PDTC组、高糖+si-Klotho组、高糖+si-Negative组和高糖+si-Klotho+PDTC组。染色质免疫共沉淀（CHIP）分组：低糖+pcDNA3.1-Vector组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组。采用实时聚合酶链式反应检测各组细胞miR-21a-5p水平；Western blot检测Klotho、纤连蛋白（FN）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、核因子κB（NF-κB）、NF-κB 抑制因子（IκB）表达水平；CHIP检测NF-κB对miR-21a-5p启动子的直接作用。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与低糖组比较，高糖组Klotho蛋白表达下降至60.8%（ P<0.05），miR-21a-5p表达升高至3.203倍（ P<0.01），FN和α-SMA表达明显升高。随着高糖刺激时间延长，Klotho蛋白表达水平逐渐降低，而miR-21a-5p表达水平逐渐升高，呈现相反的变化趋势（ P<0.05）。高糖组核蛋白NF-κB和miR-21a-5p表达水平是低糖组的2.934倍和3.154倍（均 P<0.01），而过表达Klotho后，NF-κB和miR-21a-5p表达水平分别下降至高糖组的50.18%和49.24%（均 P<0.05）。CHIP结果显示：高糖+pcDNA3.1-Vector组与低糖+pcDNA3.1-Vector组相比，NF-κB和miR-21a-5p启动子结合显著增加至3.121倍（1.000±0.742比3.121±0.115， P<0.01）；而过表达Klotho能显著减弱高糖引起的NF-κB和miR-21a-5p启动子结合至54.21%（3.121±0.115比1.692±0.073， P<0.01）。 结论:Klotho可抑制高糖条件下肾小管上皮细胞NF-κB和miR-21a-5p启动子的结合，使miR-21a-5p表达减少，从而减轻肾小管上皮细胞间质转分化。

微RNAs 肾小管上皮细胞 上皮间质转分化 Klotho

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第一

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zhtnb202010016

1.深圳市人民医院　暨南大学第二临床医学院　南方科技大学第一附属医院内分泌科　518020
2.南方医科大学南方医院内分泌代谢科，广州　510515

薛萌,杨炎林,乐颖,等. Klotho通过抑制高糖诱导的微RNA-21a-5p高表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制[J]. 中华糖尿病杂志,2020,12(10):790-796.

薛萌.,杨炎林.,乐颖.,邹美娜.,贾懿劼.,...&薛耀明.(2020).Klotho通过抑制高糖诱导的微RNA-21a-5p高表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制.中华糖尿病杂志,12(10),790-796.

薛萌,et al."Klotho通过抑制高糖诱导的微RNA-21a-5p高表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制".中华糖尿病杂志 12.10(2020):790-796.