滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立

Establishment of the ultra-sensitive detection method for HIV integrase by rolling circle amplification combined with DNA nanosensor

陈辅明1; 王婧1; 李富荣2

2023

10.19871/j.cnki.xfcrbzz.2023.06.001

新发传染病电子杂志   影响因子和分区

2096-2738

目的 以HIV整合酶(integrase,IN)为特异性靶标,利用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合DNA纳米传感器建立一种HIV IN等温扩增检测方法(rolling-circle-enhanced-IN-activity-detection,REIAD).方法 提取纯化的重组HIV IN或包装HIV颗粒,以HIV IN活性为靶标,设计IN识别的附着位点(attachment site,att)长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)和双链DNA环,与DNA纳米传感器检测技术结合,将LTR固定于载玻片表面并催化其末端插入双链DNA环生成一个有切口的DNA环,进行界面RCA扩增和荧光标记探针检测,建立REIAD.通过检测梯度稀释HIV IN和包装HIV颗粒,评价检测方法的敏感性,确定检测限;通过梯度稀释小鼠白血病病毒(murine leukemia virus,MLV)和HIV IN抑制剂雷特格韦作用,评价检测方法的特异性.通过对梯度稀释HIV IN中加入HEK293全细胞提取物及10%胎牛血清细胞培养基检测,评价患者血浆样本检测的可行性.结果 REIAD方法在37℃、整合50min、滚环扩增30min条件下完成梯度稀释HIV IN及包装HIV颗粒的检测,具有良好的敏感性,重组HIV IN和包装HIV颗粒的最低检出限可达15fmol和2TU/μl,与MLV无交叉反应,具有良好的特异性.结论 本研究建立的REIAD检测方法具有敏感性高、特异性好,操作简便,平台要求低等优点,有望为HIV早期检测提供一种新的方法.

纳米传感器 HIV检测 整合酶 滚环扩增

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第一

2020A1515110521:广东省基础与应用基础研究基金联合基金 ; GJHZ201908211641420866:深圳市国际合作研究项目 ; JCYJ20190807144609346:深圳市基础研究专项面上项目

WanFang

xfcrbdzzz202306001

1.深圳市人民医院(南方科技大学第一附属医院)转化医学协同创新中心,广东 深圳 518020;广东省干细胞与细胞治疗工程技术研究中心,深圳市干细胞研究与临床转化重点实验室,深圳免疫细胞公共服务平台,广东 深圳 518020
2.深圳市人民医院(南方科技大学第一附属医院)转化医学协同创新中心,广东 深圳 518020;广东省干细胞与细胞治疗工程技术研究中心,深圳市干细胞研究与临床转化重点实验室,深圳免疫细胞公共服务平台,广东 深圳 518020;南方科技大学健康医学研究院,广东 深圳 518055

陈辅明,王婧,李富荣. 滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立[J]. 新发传染病电子杂志,2023,8(6):1-8.

陈辅明,王婧,&李富荣.(2023).滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立.新发传染病电子杂志,8(6),1-8.

陈辅明,et al."滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立".新发传染病电子杂志 8.6(2023):1-8.