柴胡-白芍含药血浆通过miR-1297/PTEN信号轴对HepG2肝癌细胞的影响及机制研究

Bupleuri Radix-Paeoniae Radix Alba medicated plasma exerts effects on HepG2 hepatoma cells by regulating miR-1297/PTEN signaling axis

丁琳; 王若宇2; 张帆; 伍梦思; 陈斌2; 孙克伟2

2024

10.19540/j.cnki.cjcmm.20231114.706

中国中药杂志   影响因子和分区

1001-5302

研究柴胡-白芍含药血浆通过微小RNA-1297(microRNA-1297,miR-1297)/第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)信号轴对肝癌细胞HepG2的影响及作用机制.通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测miR-1297、PTEN mRNA在肝癌细胞株中的表达,双荧光素酶报告实验验证miR-1297与PTEN的靶向关系.将HepG2肝癌细胞分为空白血浆组、含药血浆组、miR-1297 inhibitor组、miR-NC组、miR-1297 inhibitor+含药血浆组.细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞增殖,筛选含药血浆最佳干预浓度及时间.细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平.RT-qPCR检测miR-1297、PTEN、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)基因表达.蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测PTEN、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达.结果显示,miR-1297 在HepG2细胞中表达水平最高,选取HepG2细胞进行后续实验.双荧光素酶报告实验显示miR-1297可与PTEN mRNA 3'-非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)结合.柴胡-白芍含药血浆可以抑制HepG2细胞增殖,最佳干预质量分数及时间为20％、72 h.与空白血浆组相比,含药血浆组、miR-1297 inhibitor组及miR-1297 inhibitor+含药血浆组均能抑制HepG2细胞增殖、侵袭及迁移,可以提高G0/G,期细胞比例,降低S期细胞比例,提高细胞凋亡率.柴胡-白芍含药血浆可以降低HepG2细胞 miRNA-1297、PI3K、Akt mRNA 表达,提高 PTEN mRNA 表达;可以下调 p-PI3K、p-Akt、Bcl-2 蛋白表达;上调 PTEN、caspase-3、caspase-9、Bax的蛋白表达.综上,柴胡、白芍可以抑制HepG2肝癌细胞miR-1297的表达,上调PTEN表达,负调控PI3K/Akt信号通路,从而抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡.

柴胡 白芍 miRNA-1297 PTEN PI3K/Akt 肝癌

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82104809:国家自然科学基金 ; :深圳市科技计划47号项目 ; :湖南中医药大学双一流学科建设项目 ; 2022CX29:湖南中医药大学研究生创新课题

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1.湖南中医药大学第一中医临床学院,湖南长沙 410007
2.湖南中医药大学第一附属医院湖南中医药大学中医学国内一流建设学科,湖南长沙 410007
3.南方科技大学附属第二医院,广东深圳 518112

丁琳,王若宇,张帆,等. 柴胡-白芍含药血浆通过miR-1297/PTEN信号轴对HepG2肝癌细胞的影响及机制研究[J]. 中国中药杂志,2024,49(4):1073-1081.

丁琳,王若宇,张帆,伍梦思,陈斌,&孙克伟.(2024).柴胡-白芍含药血浆通过miR-1297/PTEN信号轴对HepG2肝癌细胞的影响及机制研究.中国中药杂志,49(4),1073-1081.

丁琳,et al."柴胡-白芍含药血浆通过miR-1297/PTEN信号轴对HepG2肝癌细胞的影响及机制研究".中国中药杂志 49.4(2024):1073-1081.